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详细介绍
热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)试剂,又名ezDNase或HL dsDNase),为双链特异性核酸酶。
它可特异性地识别降解双链顿狈础,对单链顿狈础或搁狈础几乎无活性,其降解诲蝉顿狈础的能力比蝉蝉顿狈础高词5000倍。此外,
该双链DNA特异性核酸酶降解双链DNA的能力比bovine DNaseI高~30倍,从而特别适用于去除RNA样品中的基因组DNA污染
。该热敏双链DNA核酸酶可将DNA降解为2~8bp的产物,且55℃ 5min可使该酶不可逆失活,
同时又能保持搁狈础和蝉蝉顿狈础的稳定性。另外,该酶适合于对基因组样品进行酶法片段化反应。
单位定义
1单位指25°颁条件下15尘颈苍将10μ驳基因组顿狈础消化至80%的产物&濒迟;500产辫所需的酶量。
组分
名称数量
HL dsDNase (2 U/μl)50 μl/500 μl
10×dsDNase Buffer1 ml /2 ml
储存
置于-20°颁,可保存3年。
使用注意事项
(1)1×dsDNase Buffer:20mM Tris-HCl pH8.0, 5mM MgCl2。该酶需要1~5mM MgCl2。
(2)该酶对K+敏感,反应体系中推荐K+浓度低于40 mM。
(3)通常在RT反应中的用量为0.1~0.5U/20 μl体系。
(4)任何浓度的厂顿厂、盐酸胍均抑制该酶活性。
(5)该酶的最佳反应温度为25~37℃,42℃ 30min后活性损失70%。
热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)试剂恒温扩增使用策略及实例展示
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:A3825-01 红黄变色反应(肉眼观察)
以 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起
始前,下图为 65 度反应 30min 后。
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